解淀粉芽孢***代理-解淀粉芽孢***-天津坤禾生物

菌株的鉴定：对筛选得到的乳酸菌进行16S rDNA序列分析，确定其种属。将活化好的菌液，进行菌株的全***组脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid， DNA)的提取[16]，然后对***组DNA的16S rDNA区域进行PCR扩增，上游引物27F序列5′-AGAGTTTGATCCTGGCCTCA-3′，下游引物1492R序列：5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′，扩增片段为1 500 bp。PCR体系50 μL：10×buffer 5 μL；脱氧核糖核苷酸三磷酸(deoxy-ribonucleoside triphosphate， dNTP) 5 μL；上游引物(25 μmol/L)0.5 μL；下游引物(25 μmol/L)0.5 μL；Taq DNA 聚合酶(250 U)0.5 μL；模板DNA 1.5 μL ；ddH2O 37 μL。PCR扩增条件为：95 ℃ 3 min；95 ℃ 10 s；55 ℃ 30 s；72 ℃ 1 min；72 ℃ 5 min，2～4反应步骤进行30个循环。扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测其纯度及浓度，将达到测序要求的扩增产物送至上海华大***进行测序，将测序结果在美国国立生物技术信息中心(national center for biotechnology information， NCBI)上BLAST进行比对，并确定其种属。

解淀粉芽孢***(Bacillus amy***iquefaciens)为芽孢***属，是一种与枯草芽孢***(Bacillus subtilis)亲缘性很高的***，其在生长过程中可以产生一系列能够******和***活性的代谢物。2007年公布的解淀粉芽孢***FZB42的全***组测序使得人们对这种具有多种次生代谢物生产能力的芽孢***有了更深层次的认识，促进了解淀粉芽孢***的生物利用。本文旨在就解淀粉芽孢***的生理生化特性、抑菌物质及其作为益生菌的应用等方面进行综述。1、解淀粉芽孢***的生理生化特性解淀粉芽孢***可产生多种α-淀粉酶及蛋白酶，与枯草芽孢***在形态、培养特征及生理生化特性方面非常相似；属兼性，菌落在LB培养基上和牛肉膏蛋白胨培养基上呈淡***不透明菌落，表面粗糙，有隆起，边缘不规则，在多种培养基上均不产色素；液体培养静止时有菌膜形成；革兰氏染色呈阳性，杆状，可形成内生芽孢，呈椭圆形，解淀粉芽孢***，两端钝圆，芽孢囊不膨大，中生到次端生，有运动性；水解淀粉和明胶，乙酰甲(V-P)试验阴性，还原试验阴性，苯丙氨酸脱氨酶试验、试验、红(MR)试验、试验均为阴性[ 1，2，解淀粉芽孢***厂家，3 ]。研究表明，不同的解淀粉芽孢***菌株对培养基成分及培养条件要求不同，但是总体来说维持在一定的范围内，在基本培养基中能够良好的生长，其培养温度一般为31~37 ℃，培养液pH为中性，180~200 r/min培养时间16~24 h为宜[ 4，5，6 ]。

菌株的分离[14-15]：先取1 mL醋醅样品加入9 mL灭过菌的生理盐水中，然后依次做梯度稀释至10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6，然后用灭过菌的移液管各浓度吸取100 μL醋醅移至培养基上，在37 ℃的恒温培养箱中培养24～36 h后，观察单菌落，解淀粉芽孢***代理，挑取不同形态、大小的单菌落进行划线纯化，3次分离纯化之后，对菌株进行革兰氏染色镜检，并确定菌株形态，将镜检菌株接种在MRS液体培养基里于试管中进行传代培养到20代，置于4 ℃冰箱保存，备用。